계지탕연․건조엑스 Gyejitang Soft․Dry Extract
이 약은 정량할 때 환산한 건조물 1.0 g에 대하여 계지 중 신남산 (C 9 H 8 O 2 : 148.16) 0.11 mg, 작약 중 패오니플로린 (C 23 H 28 O 11 : 480.46) 7.6 mg 및 감초 중 글리시리진산 (C 42 H 62 O 16 : 822.93) 5.7 mg 이상을 함유한다.
제 법
1 회 량 중
계 지 1.33 g
작 약 1.33 g
대 추 1.33 g
생 강 1.33 g
감 초 0.67 g
위의 생약을 정선하여 약전 통칙 중 절도에 따라 조절로 한 다음 원료약품의 분량대로 각 생약을 달아 추출기에 넣고 8 ~ 10 배량의 「상수」 또는 「정제수」를 넣어 80 ~ 100 ℃에서 2 ~ 3 시간 추출하여 추출액을 여과하고 여액을 60 ℃ 이하에서 감압농축하여 연조엑스 1.58 ~ 2.00 g 또는 적당한 방법으로 건조한 건조엑스 0.65 ~ 0.82 g을 얻는다.
확인시험 (제 1 법) 또는 (제 2 법) 또는 (제 3 법)을 실시한다.
(제 1 법) 1) 계지 이 약을 가지고 계지 약 1 g에 해당하는 양을 달아 물 10 mL를 넣고 5분간 흔들어 섞은 다음 디에틸에테르 25 mL을 넣어 30분간 초음파 추출한 다음 여과한다. 여액 중 디에틸에테르층을 취하여 감압농축하고 디에틸에테르 2 mL에 녹여 검액으로 한다. 따로 신남산표준품 1 mg을 달아 메탄올 2 mL에 녹여 표준액으로 한다. 이들 액을 가지고 박층크로마토그래프법에 따라 시험한다. 검액 및 표준액 10 uL씩을 박층크로마토그래프용실리카겔 (형광제 첨가)을 써서 만든 박층판에 점적한다. 다음에 헥산・아세트산에틸・포름산・물혼합액(60 : 40 : 4 : 1)을 전개용매로 하여 약 10 cm 전개한 다음 박층판을 바람에 말린다. 여기에 자외선 (주파장 254 nm)을 쪼일 때 검액에서 얻은 여러 개의 반점 중 1개의 반점은 표준액에서 얻은 반점과 색상 및 R f 값이 같다.
2) 작약 이 약을 가지고 작약 약 1 g에 해당하는 양을 달아 물 5 mL를 넣고 5 분간 흔들어 섞은 다음 메탄올 10 mL를 넣고 30분간 초음파 추출한 다음 여과하여 검액으로 한다. 따로 패오니플로린표준품 1 mg을 달아 메탄올 2 mL에 녹여 표준액으로 한다. 이들 액을 가지고 박층크로마토그래프법에 따라 시험한다. 검액 및 표준액 10 uL씩을 박층크로마토그래프용실리카겔 (형광제 첨가)을 써서 만든 박층판에 점적한다. 다음에 아세트산에틸・메탄올・물혼합액(20 : 3 : 2)을 전개용매로 하여 약 10 cm 전개한 다음 박층판을 바람에 말린다. 여기에 4-메톡시벤즈알데히드・황산시액을 고르게 뿌린 다음 105 ℃에서 가열할 때 검액에서 얻은 여러 개의 반점 중 1개의 반점은 표준액에서 얻은 반점과 색상 및 R f 값이 같다.
3) 대추 이 약을 가지고 생약시험법 중 대추 확인시험법에 따라 시험한다.
4) 생강 이 약을 가지고 생강 약 2 g에 해당하는 양을 달아 물 10 mL를 넣고 5분간 흔들어 섞은 다음 디에틸에테르 25 mL을 넣어 30분간 초음파 추출한 다음 여과한다. 여액 중 디에틸에테르층을 취하여 감압농축하고 디에틸에테르 2 mL에 녹여 검액으로 한다. 따로 6-징게롤표준품 1 mg을 달아 메탄올 2 mL에 녹여 표준액으로 한다. 이들 액을 가지고 박층크로마토그래프법에 따라 시험한다. 검액 및 표준액 10 uL씩을 박층크로마토그래프용실리카겔 (형광제 첨가)을 써서 만든 박층판에 점적한다. 다음에 헥산・아세트산에틸혼합액(1 : 1)을 전개용매로 하여 약 10 cm 전개한 다음 박층판을 바람에 말린다. 여기에 4-디메틸아미노벤즈알데히드 시액을 고르게 뿌린 다음 105 ℃에서 가열할 때 검액에서 얻은 여러 개의 반점 중 1개의 반점은 표준액에서 얻은 반점과 색상 및 R f 값이 같다.
5) 감초 이 약을 가지고 감초 약 1 g에 해당하는 양을 달아 물 5 mL를 넣고 5 분간 흔들어 섞은 다음 메탄올 10 mL를 넣고 30분간 초음파 추출한 다음 여과하여 검액으로 한다. 따로 글리시리진산표준품 1 mg을 달아 메탄올 2 mL에 녹여 표준액으로 한다. 이들 액을 가지고 박층크로마토그래프법에 따라 시험한다. 검액 및 표준액 10 uL씩을 박층크로마토그래프용실리카겔 (형광제 첨가)을 써서 만든 박층판에 점적한다. 다음에 아세트산에틸・메탄올・물・포름산혼합액(15 : 2 : 1 : 1)을 전개용매로 하여 약 10 cm 전개한 다음 박층판을 바람에 말린다. 여기에 자외선 (주파장 254 nm)을 쪼일 때 검액에서 얻은 여러 개의 반점 중 1개의 반점은 표준액에서 얻은 반점과 색상 및 R f 값이 같다.
(제 2 법) 1) 계지, 작약 및 감초 정량법에 따라 시험할 때 검액은 표준액과 같은 머무름시간에서 피크를 나타낸다.
2) 대추 이 약을 가지고 생약시험법 중 대추 확인시험법에 따라 시험한다.
3) 생강 (제 1 법)에 따라 시험한다.
(제 3 법) 1) 계지, 작약, 생강 및 감초 이 약 약 1 g을 달아 50 % 메탄올 10 mL를 넣고 30분간 초음파 추출한 다음 여과하여 검액으로 한다. 따로 신남산표준품 5 mg을 달아 메탄올을 넣어 10 mL로 하여 표준액으로 한다. 검액 및 표준액 10 uL씩을 가지고 다음 조건으로 액체크로마토그래프법에 따라 시험할 때 표준액과 같은 머무름시간에서 피크를 나타내고, 그림과 같이 신남산표준품표준액과 비교하여 상대머무름 시간을 나타낸다.
조작조건
검출기 : 자외부흡광광도계 (측정파장 250 nm, 205 nm)
칼 럼 : 안지름 약 4 ~ 6 ㎜, 길이 15 ~ 25 ㎝인 스테인레스강판에 5 ~ 10 μm의 액체크로마토그래프용옥타데실실릴실리카겔을 충전한다.
이동상 : 이동상 A 및 이동상 B를 가지고 다음과 같이 단계적 또는 농도기울기적으로 제어한다.
이동상 A - 아세토니트릴
이동상 B - 0.01 % 인산액
시간(분) | 이동상 A (vol%) | 이동상 B (vol%) |
0 | 10 | 90 |
15 | 25 | 75 |
25 | 40 | 60 |
35 | 70 | 30 |
40 | 100 | 0 |
유 량 : 1.0 mL/분
시스템적합성
시스템의 성능 : 검액을 가지고 위의 조건으로 조작할 때 각각의 피크가 완전하게 분리되도록 농도구배조건을 조정한다.
시스템의 재현성 : 표준액 10 μL씩을 가지고 위의 조건으로 시험을 6 회 반복할 때 신남산 피크면적에 대한 상대표준편차는 2.0 % 이하이다. 또한, 신남산의 머무름시간에 대하여 주요 성분의 상대머무름시간은 다음의 표와 같이 확인되어야 한다.
성분 | 상대머무름시간 | |
① | 패오니플로린 | 0.50 |
② | 신남산 | 1.00 |
③ | 글리시리진산 | 1.20 |
④ | 6-징게롤 | 1.31 |
(검출파장 : 250 nm)
(검출파장 : 205 nm)
① 패오니플로린, ② 신남산, ③ 글리시리진산, ④ 6-징게롤
2) 대추 이 약을 가지고 생약시험법 중 대추 확인시험법에 따라 시험한다.
순도시험
1) 중금속 총 중금속 30 ppm 이하
2) 잔류농약 가) 총 디디티(p,p'-DDD, p,p'-DDE, o,p'-DDT 및 p,p'-DDT의 합계) 0.1 ppm 이하
나) 디엘드린 0.01 ppm 이하
다) 총 비에이치씨(α,β,γ 및 δ-BHC의 합계) 0.2 ppm 이하
라) 알드린 0.01 ppm 이하
마) 엔드린 0.01 ppm 이하
건조감량
70.9 % 이하 (연조엑스에 한한다)
미생물한도
시험할 때 적합하다.
정 량 법
(제 1 법) 또는 (제 2 법)을 실시한다.
(제 1 법) 1) 계지 중 신남산 이 약 약 1 g을 정밀하게 달아 이하 생약시험법 중 계지 정량법에 따라 시험한다.
2) 작약 중 패오니플로린 이 약 약 1 g을 정밀하게 달아 이하 생약시험법 중 작약 정량법에 따라 시험한다.
3) 감초 중 글리시리진산 이 약 약 1 g을 정밀하게 달아 이하 생약시험법 중 감초 정량법에 따라 시험한다.
(제 2 법) 1) 계지 중 신남산, 작약 중 패오니플로린, 감초 중 글리시리진산 이 약 이 약 3 g을 정밀하게 달아 50 % 메탄올 50 mL을 넣어 30 분간 초음파 추출한 다음 여과하고 여액을 50 ℃에서 농축한다. 농축물을 50 % 메탄올에 녹여 20 mL로 한 다음, 이를 멤브레인 여과하여 검액으로 한다. 따로 신남산 표준품 3 mg을 정밀하게 달아 50 % 메탄올에 녹여 정확하게 50 mL로 하여 신남산 표준원액으로 한다. 따로 패오니플로린 표준품 10 mg 및 글리시리진산 표준품 10 mg 정밀하게 달고 신남산 표준원액 5 mL을 정확하게 취하여 50 % 메탄올에 녹여 20 mL로 하여 표준액으로 한다. 검액 및 표준액을 가지고 다음 조건으로 액체크로마토그래프법에 따라 시험하여 각각의 피크면적 A T 및 A S 를 측정한다.
신남산 (C 9 H 8 O 2 )의 양 (mg)
=신남산 표준품의 양 (mg)
패오니플로린 (C 23 H 28 O 11 )의 양 (mg)
=패오니플로린 표준품의 양 (mg)
글리시리진산 (C 42 H 62 O 16 )의 양 (mg)
=글리시리진산 표준품의 양 (mg)
조작조건
칼 럼 : 안지름 4 ~ 6 mm, 길이 15 ~ 25 cm인 스테인레스관에 5 ~ 10 μm 옥타데실실릴화한 실리카겔을 충전한다.
검출기 : 자외부흡광광도계 (측정파장 250 nm)
이동상 :
시간(분) | 아세토니트릴(%) | 0.01 % 인산액 (%) |
0 - 10 | 14 | 86 |
10 - 20 | 14 → 40 | 86 → 60 |
20 - 30 | 40 → 70 | 70 → 30 |
유 속 : 1.0 mL/분
칼럼온도 : 20 ℃
저 장 법
기밀용기.