오소판물질 정 Ossopan Substance Tablets
이 약은 정량할 때 오소판물질 중 칼슘 (Ca : 40.08) 18.2 ～ 24.6 %, 인 (P : 30.97) 8.4 ～ 11.4 %, 콜라겐 23.0 ～ 31.0 %를 함유한다.
제 법
이 약은 오소판물질을 가지고 정제의 제법에 따라 만든다.
확인시험
1) 오소판물질 이 약 20 정 이상을 껍질을 벗긴 다음 질량을 달아 가루로 하여 오소판물질로서 약 600 mg에 해당하는 양을 달아 마개달린 원심분리관에 넣고 물 10 mL를 넣어 실온에서 2 시간 세게 흔들어 섞어 원심분리 (4,000 rpm, 5 분간)시킨다. 이 액의 상층인 물층을 검액으로 한다. 따로 오소판물질 약 600 mg을 달아 검액과 동일하게 처리하여 표준액으로 한다. 이들 액을 가지고 박층크로마토그래프법에 따라 시험한다. 검액과 표준액 20 μL씩을 MN300 Cellulose을 써서 만든 박층판에 점적한다. 다음에 1-프로판올․25% 암모니아시액․물혼합액(6 : 3 : 1) 또는 포화황산암모늄액․물․ 2 -프로판올혼합액(79 : 19 : 2)을 전개용매로 하여 약 10 cm 전개한 다음 박층판을 바람에 말린다. 여기에 자외선 (주파장 254 nm 및 365 nm)을 쪼일 때 검액에서 얻은 여러 개의 반점은 표준액에서 얻은 반점과 색상 및 R f 값이 같다.
2) 인산칼슘 가) 칼슘의 확인 이 약 20 정 이상을 껍질을 벗긴 다음 질량을 달아 가루로 하여 오소판물질로서 약 100 mg에 해당하는 양을 달아 아세트산(100) 3 mL와 물 5 mL를 넣고 잠깐 끊인 다음 여과한다.(A액) 이 액 1 mL를 3.5 % 수산암모늄시액 1 mL와 섞으면 백색 결정성 침전물이 생성되며, 이 침전물은 10 % 염산을 넣으면 녹고, 3 % 암모니아 용액을 넣으면 다시 침전된다.
나) 인산기의 확인 A액 1 mL와 몰리브덴산바나딘산암모늄시액 2 mL를 섞으면 노란색을 나타낸다.
○ 몰리브덴산바나딘산암모늄시액 : 칠몰리브덴산육암모늄사수화물 4 g을 물 40 mL에 녹이고, 따로 바나딘산암모늄 0.1 g을 물 30 mL에 녹인 다음 두 용액을 섞는다. 이 용액에 55 % 질산 20 mL를 넣어 섞고 물로 100 mL로 한다.
3) 콜라겐성 물질 이 약 20 정 이상을 껍질을 벗긴 다음 질량을 달아 가루로 하여 오소판물질로서 약 125 mg에 해당하는 양을 마개 있는 시험관에 달아 물 6 mL를 넣고 autoclave에 넣어 1 bar로 3 시간 동안 내압증기멸균하고 식힌 다음 여과하고 여지를 소량의 물로 세척한다. 여액을 1 mL가 될 때까지 감압증류시키고 6 mol/L 염산 6 mL를 넣는다. 용액을 시험관에 넣고 105 ℃로 15 시간 동안 건조시킨다. 식힌 다음 여과하고 여지를 물 소량으로 세척한 다음 여액을 감압증류하고 잔류물에 물 2 mL를 넣어 검액을 한다. 따로 히드록시프롤린 표준품 약 4.5 mg을 달아 물 2 mL를 넣고 균일하게 섞어 표준액으로 한다. 이들 액을 가지고 박층크로마토그래프법에 따라 시험한다. 검액과 표준액 1 μL씩을 MN 300 Cellulose을 써서 만든 박층판에 점적한다. 다음에 즉시 냉풍건조하고 포화시키지 않은 전개조에서 2 -프로판올․물․포름산혼합액(20 : 5 : 1)을 전개용매로 하여 약 3 시간 전개시킨다. 다음에 30 분간 냉풍건조하고 다시 3-부탄올․메틸에틸케톤․25 % 암모니아시액․물혼합액(5 : 3 : 1 : 1)을 전개용매로 하여 약 3 시간 전개시킨 다음 30 분간 온풍건조한다. 여기에 닌히드린 시액을 고르게 뿌린 다음 90 ℃로 가열할 때 많은 반점이 즉시 나타나고 일부는 5 ～ 10 시간 후에 나타난다. 검액에서 얻은 여러 개의 반점은 표준액에서 얻은 반점과 색상 및 R f 값이 같다. 프롤린과 히드록시프롤린은 노란색 반점이고, 그 외는 청자색 반점으로 나타난다.
○ 닌히드린용액 : 에탄올(99.5) 70 mL에 닌히드린 0.1 g을 녹이고 2,4,6-콜리딘 2.9 mL와 아세트산(100) 21 mL를 넣어서 혼화한다.
순도시험
중금속 가) 총 중금속 30 ppm 이하
나) 납 5 ppm 이하
다) 비소 3 ppm 이하
붕해시험
시험할 때 적합하다.
질량편차시험
시험할 때 적합하다.
미생물한도
시험할 때 적합하다.
정 량 법
1) 칼슘 이 약 20 정 이상을 껍질을 벗긴 다음 질량을 달아 가루로 하여 오소판물질로서 약 1 g에 해당하는 양을 사기도가니에 정밀하게 달아 탄화시킨 다음 회화로에서 500 ～ 600 ℃로 완전하게 회화시킨다(약 5 시간). 실리카겔 데시케이터에서 식힌 다음 6 mol/L 염산 5 mL 씩 2 회 용해 세척하여 100 mL 용량플라스크에 옮기고 물로 완전히 세척하여 표선을 채운다. 이 용액 10 mL를 취하여 물로 희석하여 300 mL로 한다. 에리오크롬블랙T․염화나트륨 지시약을 소량 넣고 암모니아․염화암모늄 완충액(pH 10.0)을 가하여 pH 10.0으로 한다(액은 붉은색). 이 액을 0.1 mol/L 에틸렌디아민테트라아세트산디나트륨시액으로 적정한다. 다만, 적정의 종말점은 액이 붉은색에서 청색으로 변할 때로 한다. 같은 방법으로 공시험을 하여 보정한다 (검액의 적정 소비량 A mL, 공시험액의 적정 소비량 B mL).
W : 검체의 양 (mg)
0.4 : 오소판물질 중 마그네슘의 실험적 함량값
0.1 mol/L 에틸렌디아민테트라아세트산디나트륨 1 mL = 4.0 mg 칼슙
2) 인 이 약 20 정 이상을 껍질을 벗긴 다음 질량을 달아 가루로 하여 오소판물질로서 약 100 mg에 해당하는 양을 정밀하게 달아 사기도가니에 넣고 탄화시킨 다음 회화로(500 ～ 600 ℃)에서 완전히 회화시키고(약 5 시간) 실리카겔 데시케이터에서 식힌 다음 6 mol/L 염산 5 mL 씩으로 2 회 용해, 세척하여 100 mL 용량플라스크에 옮기고 물로 완전히 세척하여 표선을 채운다. 이 용액 20 mL을 취하여 100 mL 용량플라스크에 넣고 올리브텐산바나딘산암모늄시액 25 mL을 넣은 다음 물로 표선을 채운다. 30 분간 방치한 다음 이 용액 5 mL을 취하여 20 mL 용량플라스크에 넣고 물로 채워 검액으로 한다. 따로 인산이수소칼륨 4.3935 g을 물에 녹여 1 L로 한다. 이 액 2.0 mL에 몰리브덴산바나딘산암모늄시액 25 mL을 넣고 물을 넣어 100 mL로 한 다음 30 분간 방치한다. 이 용액 5 mL을 취하여 20 mL 용량플라스크에 넣고 물로 표선까지 채워 표준액으로 한다. 별도로 몰리브덴산바나딘산암모늄시액 25 mL에 물을 넣어 100 mL로 하여 30 분간 방치한다. 이 용액 5 mL를 취하여 20 mL 용량플라스크에 넣고 물로 표선까지 채워 대조액으로 한다. 대조액을 대조로 하여 파장 375 nm에서 표준액과 검액의 흡광도 A s 및 A T 를 측정한다.
3) 콜라겐 이 약 20 정 이상을 껍질을 벗긴 다음 질량을 달아 가루로 하여 오소판물질로서 약 100 mg에 해당하는 양을 정밀하게 달아 100 mL 둥근플라스크에 넣고 6 mol/L 염산 10 mL를 넣고 환류냉각기를 달고 105 ℃에서 20시간 자석교반기로 교반하면서 가수분해시킨다. 식힌 다음 100 mL비커에 물 50 mL로 잘 세척하여 옮긴 다음 32 % 수산화나트륨과 묽은 염산을 사용하여 pH 5 ～ 7로 맞추고 식힌 다음 100 mL 용량플라스크에 물로 잘 세척하여 옮기고 물로 표선을 채운 다음 여과한다. 따로 히드록시프롤린 표준품 약 50 mg을 물에 녹여 50 mL 용량플라스크에 넣고 물을 넣어 표선까지 채워 표준검량선을 작성한다(S1 : 10 μg/mL, S2 : 20 μg/mL, S3 ; 30 μg/mL, S4 : 40 μg/mL, S5 : 50 μg/mL). 물 2 mL (대조액), 검액 2 mL 및 표준액 (S1～S5) 2 mL씩을 정확하게 취해 각각 25 mL씩 용량플라스크에 넣고 0.01 mol/L 황산용액, 2.5 mol/L 수산화나트륨액, 6 % 과산화수소수 2 mL씩을 차례로 넣어 섞은 다음 5 분간 가끔 흔든 다음 80 ℃ 수욕에서 때때로 세게 흔들어 주면서 5 분간 가온한다. 각 시험액을 빙수욕에서 식히고 1.5 mol/L 황산 8 mL씩을 흔들어 주면서 넣은 다음 4-디메틸아미노벤즈알데히드의 1-프로판올용액 4 mL를 넣어 잘 혼화한다. 70 ℃ 수욕에서 16 분간 가온 한 다음 흐르는 물로 식히고 대조액을 대조로 파장 555 nm에서 표준액과 검액의 흡광도 A S 및 A T 를 측정한다.
계 산 : 검액의 히드록시프롤린의 양을 표준검량선으로부터 읽는다. 여기서 읽은 값의 1/10(A)에 factor 7.46을 곱하여 콜라겐의 양(%)을 계산한다 .(콜라겐 물질은 히드록시프롤린을 13.4% 함유하므로 factor는 7.46이다).
콜라겐의 함량 (%) = A × 7.46 × × 100
A : 검체 중 의 히드록시프롤린의 양 (mg),
즉 검량선으로부터 얻은 수치 ×
저 장 법
기밀용기.