포도엽건조엑스 Grape Leaf Dry Extract
이 약은 정량할 때 환산한 건조물에 대하여 총 폴리페놀 [피로갈롤 (C 6 H 3 (OH) 3 : 126.11)로서] 30.0 % 이상, 안토시아닌류로서 0.3 % 이상, 레스베라트롤 (C 14 H 12 O 3 : 228.2)로서 0.005 % 이상을 함유한다.
제
법
세절한 포도 Vitis vinifera L. (포도과 Vitaceae)의 건조한 잎 (Vigne Rouge, 프랑스약전) 450 Kg에 「상수」 또는 「정제수」 5000 L를 넣고, 60 ℃에서 8 시간 추출한 다음 여과하고, 여액을 반건고한다. 여기에 보체로 아카시아고무를 첨가하고 건조하여 이 약 100 Kg을 얻는다.
성
상
이 약은 갈색 내지 붉은색의 가루이다.
확인시험
1) 이 약 0.5 g을 정밀하게 달아 50 % 에탄올을 넣어 10 mL로 한다. 10 분간 흔들어 섞은 다음 원심분리한 상층액을 검액으로 한다. 따로 에피카테친 표준품 및 에피갈로카테친 표준품 0.5 mg씩을 각각 정밀하게 달아 메탄올을 넣어 10 mL로 하여 표준액 A로 한다. 따로 레스베라트롤 표준품 2.5 mg을 정밀하게 달아 96 % 에탄올을 넣어 100 mL로 하여 표준액 B로 한다. 검액 및 표준액 10 μL씩을 박층크로마토그래프용실리카겔을 써서 만든 박층판에 점적한다. 다음에 톨루엔․아세톤․포름산혼합액(9 : 9 : 1)을 전개용매로 하여 약 10 cm 전개한 다음 박층판을 약 105 ℃에서 5 분간 가열하여 말린다. 여기에 Fast Blue Salt B를 0.5 % 농도로 물에 녹인 용액을 고르게 뿌릴 때 검액에서 얻은 여러 개의 반점 은 표준액에서 얻은 반점과 색상 맟 R f 값이 같다.
2) 이 약 및 피로갈롤 표준품을 가지고 흡광도 측정법에 따라 흡수스펙트럼을 측정할 때 같은 파장에서 흡수극대 (극소)를 나타낸다.
3) 정량법에 따라 시험할 때 검액과 표준액은 같은 유지시간에서 피크를 나타낸다.
순도시험
1) 중금속 총 중금속 30 ppm 이하
2) 잔류농약 가) 총 디디티(p,p'-DDD, p,p'-DDE, o,p'-DDT 및 p,p'-DDT의 합계) 0.1 ppm 이하
나) 디엘드린 0.01 ppm 이하
다) 총 비에이치씨(α,β,γ 및 δ-BHC의 합계) 0.2 ppm 이하
라) 알드린 0.01 ppm 이하
마) 엔드린 0.01 ppm 이하
건조감량
7.5 % 이하 (0.5 g, 100 ～ 105 ℃, 2 시간)
수 분
5.0 % 이하
미생물한도
시험할 때 적합하다.
정 량 법
1) 총 폴리페놀 (피로갈롤로서) 이 약 약 150 mg을 정밀하게 달아 정제수 150 mL룰 넣은 다음 환류냉각기를 달고 30 분간 가열한다. 실온으로 식힌 다음 정제수를 넣어 250 mL로 하여 여과한다. 처음 여액 50 mL를 버리고 여액 5 mL를 정확하게 취하여 정제수를 넣어 25 mL로 한다. 이 액 5 mL에 폴린페놀시액 1) 1 mL를 넣고, 15 % 탄산나트륨용액 50 mL를 넣고 혼합하여 검액으로 한다. 정확하게 2 분 후 물을 대조액으로 하여 715 nm에서 흡광도를 측정한다( A 1 ). 따로 피로갈롤 표준품 50 mg을 정제수 100 mL에 녹인다. 이 액 5 mL를 정확하게 취하여 정제수를 넣어 100 mL로 한다. 이 액 5 mL에 폴린페놀시액 1 mL를 넣고, 15 % 탄산나트륨용액 50 mL를 넣고 섞은 다음 표준액으로 한다. 정확하게 2 분 후 물을 대조액으로 715 nm에서 하여 흡광도를 측정한다( A 2 ).
1) 폴린페놀시약 : Folin-Ciocalteu's Phenol reagent, 2 mol/L (Merck)
총 폴리페놀 [피로갈롤 (C 6 H 3 (OH) 3 )로서]의 함량 (%) = 13.12 × ×
E = 검체 채취량 (g)
A 1 = 715 nm에서 검액의 흡광도
A 2 = 715 nm에서 표준액의 흡광도
○ 실험하는 동안 공기와 빛의 접촉을 피하고, 피로칼롤을 녹인 다음 15 분 내에 흡광도를 측정해야 한다.
2) 안토시아닌류 이 약 약 300 mg을 정밀하게 달아 차광하여 메탄올성 염산 200 mL를 넣어 녹인다. 이 액 5 mL를 정확하게 취하여 메탄올성 염산 2) 을 넣어 25 mL로 하여 검액으로 한다. 필요시 원심분리한다. 528 nm에서 메탄올성 염산을 대조액으로 하여 흡광도를 측정한다.
2) 메탄올성 염산(0.1 %) : 염산 1 mL를 메탄올로 1000 mL가 되게 한다.
안토시아닌류의 함량(%) = A × ×
E = 검체 채취량 (g)
A = 528 nm에서의 검액 흡광도
3) 레스베라트롤 이 약 약 1 g을 정밀하게 달아 둥근바닥플라스크에 넣고 30 mL 물에 녹인다. 여기에 아세트산에틸 30 mL를 넣은 다음 5 분 동안 세게 교반한다. 분별깔때기에 넣어 아세트산에틸층을 분리해 내고 물층을 아세트산에틸 30 mL를 5 분 동안 2 번 더 세게 교반한 다음 아세트산에틸층을 분리한 다음 아세트산에틸층을 모두모아 감압 건조하고 잔류물에 5 mL 메탄올을 넣어 다시 감압건조한다. 잔류물에 50 % 아세토니트릴 5 mL를 넣어 여과한 것을 검액으로 한다. 따로 레스베라트롤 표준품 6 mg을 정밀하게 달아 50 % 아세토니트릴 10 mL로 녹인다. 이 액 5 mL를 정확하게 취하여 50 % 아세토니트릴을 넣어 100 mL로 하여 표준액으로 한다. 검액 및 표준액 20 μL씩을 가지고 다음 조건에서 액체크로마토그래프법에 따라 시험하고 검액 및 표준액의 피크면적 A T 및 A S 를 구한다.
레스베라트롤 (C 14 H 12 O 3 )의 양(mg)
= 레스베라트롤 표준품의 양(mg) ×
조작조건
검출기 : 자외부흡광광도계 (측정파장 306 nm)
칼 럼 : 안지름 약 4.6 mm, 길이 약 25 cm인 스테인레스관에 5 μm 옥타데실릴릴환한 실리카겔을 충진한다.
이동상 : 0.1 % 오르토인산용액․아세토니트릴혼합액(4 : 1)
유 속 : 1.0 mL/분
저 장 법
기밀용기.