빌베리건조엑스 Bilberry Fruit Dry Extract
이 약은 Vaccinium myrtillus L. (철쭉과 Ericaceae)의 잘 익은 열매(Bilberry Fruit, Fresh, 유럽약전) 를 에탄올과 물을 이용하여 추출한 다음 적절한 방법으로 만든 엑스이다. 이 약은 정량할 때 환산한 건조물에 대하여 총 안토시아닌{시아니딘-3-O-글루코시드의 염화물[크리산테민 (C 21 H 21 ClO 11 : 484.8)]으로서} 32.4 ～ 39.6 % 함유한다.
성 상
이 약은 암적색 또는 보라색의 무정형 가루로 흡습성이 있다.
확인시험
이 약 약 100 mg을 달아 메탄올 25 mL에 녹여 15분간 잘 섞은 다음 여과하여 여액을 검액으로 한다. 따로 크리산테민 표준품과 미르틸린 표준품을 각 2 mg 씩 취하여 메탄올 5 mL에 녹여 표준액으로 한다. 이들 액을 가지고 박층크로마토그래프법에 따라 시험한다. 검액과 표준액 10 μL씩을 셀룰로오스를 써서 만든 박층판에 점적한다. 먼저 물․아세트산(100)․염산혼합액(82 : 15 : 3)으로 약 10 cm 전개한 다음 박층판을 따뜻한 바람에 말린 다음, 60 % 아세트산수용액을 전개용매로 다시 약 10 cm 전개한 다음 박층판을 바람에 말린다. 이것을 일광에서 관찰할 때 검액에서 얻은 반점 중 표준액에서 얻은 반점과 색상 및 R f 값이 일치하는 적자색의 크리산테민과 미르틸린의 반점이 관찰된다.
순도시험
1) 중금속 총중금속 30 ppm 이하
2) 잔류농약 가) 총 디디티(p,p'-DDD, p,p'-DDE, o,p'-DDT 및 p,p'-DDT의 합계) 0.1 ppm 이하
나) 디엘드린 0.01 ppm 이하
다) 총 비에이치씨(α,β,γ 및 δ-BHC의 합계) 0.2 ppm 이하
라) 알드린 0.01 ppm 이하
마) 엔드린 0.01 ppm 이하
3) 총 안토시아니딘 이 약 125 mg을 정밀하게 달아 메탄올 ․ 염산혼합액(49 : 1) 25 mL에 녹인 다음, 이 액 중 5 mL을 취하여 인산․물혼합액(23 : 177) 을 넣어 20 mL로 하여 검액으로 한다. 따로 빌베리건조엑스 표준품 125 mg을 정밀하게 달아 이하 검액과 같은 방법으로 하여 표준액(1)로 한다. 따로 시아니딘염산염 표준품 (유럽약전) 10 mg을 정밀하게 달아 메탄올 ․ 염산혼합액(49 : 1)에 녹여 25 mL로 한 다음, 이 액 2 mL를 취하여 인산․물혼합액(23 : 177) 을 넣어 100 mL로 하여 표준액(2)로 한다. 검액 및 표준액(2) 10 μL 씩을 가지고 다음 조건에서 액체크로마토그래프법에 따라 시험하고, 검액 및 표준액(2)의 피크면적 A T 및 A S 를 측정할 때 검액중 총 안토시아니딘(시아니딘염산염으로써) 함량은 1.0 %보다 크지 않다. (이 때, 검액 및 표준액은 4 ℃로 유지한다.)
총 안토시아니딘
A T : 검액에서 얻은 크로마토그램의 피크 (피크 9. 16. 18∼20)피크면적의 합
A S : 표준액(2)에서 얻은 크로마토그램의 시아니딘염산염(피크 16) 피크면적
W 1 : 검체의 무게(g)
W 2 : 시아니딘염산염의 무게(g)
C : 시아니딘염산염 표준품 중 시아니딘 염산염의 함량(%)
조작조건
검출기 : 자외부흡광광도계 (측정파장 535 nm)
칼 럼 : 안지름 약 4.6 mm, 길이 약 25 cm인 스테인레스강관에 5 μm의 액체크로마토그래프용옥타데실실릴실리카겔을 충전한다.
칼럼온도 : 30 ℃ 부근의 일정 온도
이동상 : 이동상 A 및 이동상 B를 가지고 다음과 같이 단계적, 농도 기울기적으로 제어한다.
이동상 A - 물 ․ 무수포름산혼합액 (183 : 17)
이동상 B - 물 ․ 메탄올 ․ 아세토니트릴 ․ 무수포름산혼합액 (83 : 45 : 45 : 17)
| 시간 | 이동상 A | 이동상 B |
| 0 ∼ 35 | 93 → 75 | 7 → 25 |
| 35 ∼ 45 | 75 → 35 | 25 → 65 |
| 45 ∼ 46 | 35 → 0 | 65 → 100 |
| 46 ∼ 50 | 0 | 100 |
유 속 : 1 mL/분
시스템적합성
피크의 확인 : 표준액(1) 및 표준액(2)에서 얻은 크로마토그램에서 안토시아닌과 안토시아니딘의 피크를 확인할 수 있다.
시스템적합성 : 표준액(1)에서 얻은 크로마토그램을 확인할 때, 시아니딘-3-O-칼락토시드(피크 3)와 델피니딘-3-아라비노시드(피크 4)가 분리되는 밸리의 기저선으로부터의 높이( H v)에 대한 시아니딘-3-O-칼락토시드(피크 3) 피크의 기저선으로부터의 높이( H p)로 피크밸리비( H p/ H v)를 구할 때 2.0 이상이다.
유지시간 : 유지시간과 피크 분리 양상은 그림1.의 크로마토그램과 유사하다.
건조감량
4.5 % 이하 (1 ｇ, 80 ℃, 진공, 3 시간)
회 분
2.0 % 이하 (1 ｇ)
미생물한도
시험할 때 적합하다.
정 량 법
이 약 125 mg을 정밀하게 달아 메탄올․염산혼합액(49 : 1) 25 mL에 녹인 다음, 이 액 중 5 mL을 취하여 인산․물혼합액(23 : 177)을 넣어 20 mL로 하여 검액으로 한다. 따로 빌베리건조엑스 표준품 (유럽약전) 125 mg을 정밀하게 달아 이하 검액과 같은 방법으로 하여 표준액(1)로 한다. 검액 및 표준액(1) 10 μL 씩을 가지고 다음 조건에서 액체크로마토그래프법에 따라 시험하고, 검액 및 표준액의 A T 및 A S 를 측정한다.
(이 때, 검액 및 표준액은 4 ℃로 유지한다.)
총 안토시아닌
A T : 검액에서 얻은 크로마토그램의 총 안토사이닌(피크 1∼8, 10∼15, 17) 피크면적의 합
A S : 표준액(1)에서 얻은 크로마토그램의 시아니딘-3-O-글루코시드의 염화물(피크 5) 피크면적
W 1 : 검체의 무게(g)
W 2 : 빌베리건조엑스 표준품의 무게(g)
C : 빌베리건조엑스 표준품 중 시아니딘-3-O-글루코시드의 염화물의 함량(%)
조작조건
검출기 : 자외부흡광광도계 (측정파장 535 nm)
칼 럼 : 안지름 약 4.6 mm, 길이 약 25 cm인 스테인레스강관에 5 μm의 액체크로마토그래프용옥타데실실릴실리카겔을 충전한다.
칼럼온도 : 30 ℃ 부근의 일정 온도
이동상 : 이동상 A 및 이동상 B를 가지고 다음과 같이 단계적, 농도 기울기적으로 제어한다.
이동상 A - 물 ․ 무수포름산혼합액 (183 : 17)
이동상 B - 물 ․ 메탄올 ․ 아세토니트릴 ․ 무수포름산혼합액 (83 : 45 : 45 : 17)
| 시간 | 이동상 A | 이동상 B |
| 0 ∼ 35 | 93 → 75 | 7 → 25 |
| 35 ∼ 45 | 75 → 35 | 25 → 65 |
| 45 ∼ 46 | 35 → 0 | 65 → 100 |
| 46 ∼ 50 | 0 | 100 |
유 속 : 1 mL/분
시스템적합성
피크의 확인 : 검액 및 표준액(1)에서 얻은 크로마토그램에서 안토시아닌과 안토시아니딘의 피크를 확인할 수 있다.
시스템적합성 : 표준액(1)에서 얻은 크로마토그램을 확인할 때, 시아니딘-3-O-칼락토시드(피크 3)와 델피니딘-3-아라비노시드(피크 4)가 분리되는 밸리의 기저선으로부터의 높이( H v)에 대한 시아니딘-3-O-칼락토시드(피크 3) 피크의 기저선으로부터의 높이( H p)로 피크밸리비( H p/ H v)를 구할 때 2.0 이상이다.
유지시간 : 유지시간과 피크 분리 양상은 그림1.의 크로마토그램과 유사하다
그림 1. 크로마토그램 예시
피크 1. 델피니딘 3-O-갈락토시드의 염화물
피크 2. 델피니딘 3-O-글루코시드의 염화물
피크 3. 시아니딘 3-O-갈락토시드의 염화물
피크 4. 델피니딘 3-O-아라비노시드의 염화물
피크 5. 시아니딘 3-O-글루코시드의 염화물
피크 6. 페투니딘 3-O-갈락토시드의 염화물
피크 7. 시아니딘 3-O-아라비노시드의 염화물
피크 8. 페투니딘 3-O-글루코시드의 염화물
피크 9. 델피니딘염산염
피크 10. 페오니딘 3-O-갈락토시드의 염화물
피크 11. 페투니딘 3-O-아라비노시드의 염화물
피크 12. 페오니딘 3-O-글루코시드의 염화물
피크 13. 말비딘 3-O-갈락토시드의 염화물
피크 14. 페오니딘 3-O-아라비노시드의 염화물
피크 15. 말비딘 3-O-글루코시드의 염화물
피크 16. 시아니딘염산염
피크 17. 말비딘 3-O-아라비노시드의 염화물
피크 18. 페투니딘염산염
피크 19. 페오니딘염산염
피크 20. 말비딘염산염
저 장 법
기밀용기.