우황
조작은 될 수 있는 대로 빛을 피하여 빨리 한다. 이 약을 가루로 하여 빌리루빈으로서 약 10 mg에 해당하는 양을 정밀하게 달아 7.5 % 염산 10 mL와 클로로포름 100 mL를 넣어 환류냉각기를 달고 61 ± 2 ℃ 수욕에서 90 분간 환류추출한다. 식힌 다음 이 혼합액을 분액깔때기에 옮기고 플라스크 내부를 클로로포름으로 씻어 분액깔때기에 합한다. 분리되는 클로로포름층을 취하고 물층은 다시 클로로포름 10 mL씩 3 회 추출하여 클로로포름층을 모두 합하고 무수황산나트륨 5 g을 넣어 흔들어 섞은 다음 여과한다. 여액에 클로로포름을 넣어 정확하게 200 mL로하여 총 빌리루빈의 검액으로 한다. 따로 이 약의 가루를 빌리루빈으로서 약 10 mg에 해당하는 양을 정밀하게 달아 클로로포름 200 mL를 넣어 녹여 여과한 여액을 유리빌리루빈의 검액으로 한다. 따로 빌리루빈 표준품 약 10 mg을 정밀하게 달아 클로로포름을 넣어 녹여 200 mL로 하여 표준액으로 한다. 검액 및 표준액 10 μL 씩을 가지고 다음의 조건으로 액체크로마토그래프법에 따라 시험하여 각 액의 빌리루빈 피크면적 A T 및 A S 를 측정한다.
총 빌리루빈의 양(mg)
= 빌리루빈 표준품의 양(mg)
유리빌리루빈의 양(mg)
= 빌리루빈 표준품의 양(mg)
결합형빌리루빈 (C 33 H 36 N 4 O 6 )의 양(mg)
= 총 빌리루빈의 양(mg) 유리빌리루빈의 양(mg)
(다만, 복합제제의 경우에는 계산식에서 1.25를 곱한다)
조작조건
칼 럼 : 안지름 4 ～ 6 mm, 길이 15 ～ 25 cm인 스테인레스관에 5 ～ 10 μm의 옥타데실실릴화한실리카겔이 충전된 칼럼
검출기 : 가시부흡광광도계 (측정파장 436 nm)
이동상 : 메탄올ㆍ2 % 아세트산(31)혼합액(9 : 1)
유 량 : 1.0 mL/분